Perilipin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401305-ACT

PLIN1 codifica la perilipina-1, una proteina di impalcatura associata alle goccioline lipidiche che regola l’accumulo e la mobilizzazione dei lipidi neutri negli adipociti controllando l’accesso di lipasi come ATGL e la lipasi ormone-sensibile (HSL) ai triacilgliceroli. Attraverso un rimodellamento dipendente dalla fosforilazione, la perilipina integra la segnalazione cAMP/PKA con i programmi lipolitici e lipogenici, plasmando il flusso degli acidi grassi, le dimensioni dell’adipocita e la dinamica delle goccioline lipidiche. Un’alterata espressione o funzione di PLIN1 è stata collegata a una disregolazione dell’omeostasi del tessuto adiposo, a fenotipi metabolici associati a insulino-resistenza e a quadri simili alla lipodistrofia, rendendolo un nodo rilevante negli studi sulla biologia degli adipociti e sul bilancio energetico sistemico. Nei modelli cellulari, l’attività di PLIN1 interseca vie che regolano l’utilizzo mitocondriale dei substrati, le risposte di stress del reticolo endoplasmatico al sovraccarico lipidico e la segnalazione infiammatoria guidata dall’accumulo ectopico di lipidi.

Perilipin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLIN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Perilipin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLIN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLIN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Perilipin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLIN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Perilipin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Perilipin nelle cellule tumorali con espressione di PLIN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.