Per1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401260-ACT

ヒトPER1は、Period circadian regulator 1（Per1）をコードしており、転写―翻訳フィードバックループを介して約24時間周期のリズムを生み出す分子時計の中核構成要素です。Per1は、CLOCK/ARNTLによって駆動される転写およびCRYによる抑制と連動しながら、細胞周期の進行、DNA損傷応答、代謝、内分泌シグナル伝達を制御する経路における遺伝子発現の概日調節に関与します。PER1の発現量やリズム性の変化は、概日リズム障害と関連づけられているほか、腫瘍生物学、気分関連表現型、代謝調節異常に関する研究でも報告されており、細胞のタイミング機構に対する広範な影響を反映しています。PER1は環境からの手がかりを下流の転写プログラムへ結び付けるため、時計制御ネットワークや時刻依存的な細胞表現型を解析する目的で、しばしば利用されます。

Per1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PER1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Per1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PER1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPER1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Per1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPER1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPer1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPER1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPer1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。