Plasmide CRISPR d'Activation (h) Peg10: sc-406028-ACT

PEG10 (paternally expressed gene 10) code Peg10, une protéine domestiquée dérivée d’un rétrotransposon, impliquée dans le développement placentaire, la survie cellulaire et la régulation de la prolifération. Peg10 a été associée au renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine ainsi qu’à des interactions avec des programmes de régulation transcriptionnels et post‑transcriptionnels, ce qui étaye des rôles dans la résistance à l’apoptose et le contrôle du cycle cellulaire. Une expression dérégulée de PEG10 est fréquemment observée dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs ou du développement, ce qui en fait une cible utile pour étudier les voies qui gouvernent la croissance, la différenciation et les réponses au stress. Dans des modèles cellulaires humains, PEG10 constitue un nœud accessible pour l’étude de réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée et des conséquences d’une surexpression anormale d’un gène endogène.

Peg10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PEG10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Peg10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PEG10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PEG10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Peg10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PEG10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Peg10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Peg10 dans les cellules tumorales présentant une expression de PEG10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.