PDIR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405741

Panoramica

PDIA5 codifica la proteina umana correlata all’isomerasi delle proteine disolfuro PDIR, un’ossidoreduttasi residente nel reticolo endoplasmatico che supporta il ripiegamento ossidativo delle proteine e l’isomerizzazione dei legami disolfuro. In quanto membro della famiglia delle isomerasi delle proteine disolfuro, PDIR contribuisce alla proteostasi del RE facilitando la maturazione delle proteine secrete e di membrana e coordinandosi con le reti di chaperoni attivate durante la risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response). L’attività di PDIA5 si intreccia con il controllo qualità del RE, l’omeostasi redox e la degradazione associata al RE (ERAD), processi spesso rimodellati nel cancro, nello stress metabolico e in contesti neurodegenerativi. Alterazioni della funzione della famiglia PDI sono comunemente associate a un aumento della segnalazione di stress del RE e a cambiamenti nella capacità della via secretoria, rendendo PDIA5 un nodo utile per studi meccanicistici sul ripiegamento dipendente dal redox.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDIR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDIA5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDIA5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDIA5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDIR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDIA5 per lo studio della segnalazione di PDIR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDIA5 critici per la funzione di PDIR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDIA5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDIR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDIR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDIA5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDIR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDIR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDIA5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDIA5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.