Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDIR (h): sc-405741

Présentation

PDIA5 code la protéine humaine PDIR (protein disulfide isomerase-related protein), une oxydoréductase résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui soutient le repliement oxydatif des protéines et l’isomérisation des ponts disulfure. En tant que membre de la famille des isomérases de ponts disulfure (PDI), PDIR contribue à la protéostasie du RE en facilitant la maturation des protéines sécrétées et membranaires et en coopérant avec les réseaux de chaperonnes mobilisés lors de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). L’activité de PDIA5 s’inscrit à l’interface du contrôle qualité du RE, de l’homéostasie rédox et de la dégradation associée au RE (ERAD), des processus fréquemment remaniés dans le cancer, le stress métabolique et les contextes neurodégénératifs. Des altérations de la fonction des protéines de la famille PDI sont souvent associées à une augmentation de la signalisation de stress du RE et à des modifications de la capacité de la voie de sécrétion, faisant de PDIA5 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du repliement dépendant du rédox.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDIR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDIA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDIA5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDIA5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDIR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDIA5 pour l'étude de la signalisation de PDIR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDIA5 essentiels à la fonction de PDIR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDIA5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDIR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDIR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDIA5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDIR plasmide HDR (h) et le PDIR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDIA5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDIA5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.