PDGF-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401977

Panoramica

PDGFC codifica il fattore di crescita derivato dalle piastrine C (PDGF-C), un fattore di crescita secreto che viene attivato proteoliticamente e segnala principalmente attraverso complessi del recettore PDGF per regolare la proliferazione e la migrazione delle cellule mesenchimali, nonché il rimodellamento della matrice extracellulare. PDGF-C contribuisce alla comunicazione paracrina tra i compartimenti stromale ed epiteliale e attiva vie a valle quali PI3K–AKT e MAPK/ERK, che coordinano lo sviluppo e la riparazione dei tessuti. Una deregolazione della segnalazione di PDGF-C è associata ad angiogenesi aberrante, rimodellamento legato alla fibrosi e interazioni tumore–stroma in molteplici contesti patologici. Di conseguenza, PDGFC è spesso studiato in modelli di biologia vascolare, riparazione delle ferite, microambienti infiammatori e crosstalk della segnalazione oncogenica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDGFC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDGFC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDGFC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDGF-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDGFC per lo studio della segnalazione di PDGF-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDGFC critici per la funzione di PDGF-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDGFC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDGF-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDGF-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDGFC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDGF-C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDGF-C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDGFC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDGFC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.