PDGF-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437277

Panoramica

PDGF-B codifica la subunità B del fattore di crescita derivato dalle piastrine (platelet-derived growth factor), un fattore di crescita secreto che forma omo- o eterodimeri per attivare la segnalazione di PDGFR e le vie a valle PI3K–AKT e RAS–MAPK. Nelle cellule di ratto, PDGF-B regola la proliferazione e la migrazione delle cellule mesenchimali, il reclutamento dei periciti e la maturazione vascolare, influenzando il rimodellamento della matrice extracellulare e l’omeostasi tissutale. La segnalazione guidata da PDGF-B si interseca con la riparazione delle ferite e con le risposte fibroproliferative, e la sua disregolazione è associata ad angiogenesi patologica e ad attivazione stromale aberrante, rilevanti per la biologia cardiovascolare e renale. Poiché PDGF-B modula la comunicazione paracrina tra compartimenti endoteliali, murali e stromali, è ampiamente studiato in modelli di rimodellamento associato all’infiammazione e di dinamiche del microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDGF-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di PDGF-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di PDGF-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal PDGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDGF-B Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR PDGF-B (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.