Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-A (h): sc-400711

Présentation

PDGFA code le facteur de croissance dérivé des plaquettes A (PDGF-A), un facteur de croissance sécrété dimérique qui transmet ses signaux principalement via PDGFRα afin de réguler la prolifération, la migration et la survie des cellules mésenchymateuses. PDGF-A est un acteur majeur des réponses mitogènes et chimiotactiques en interface avec les voies de signalisation MAPK/ERK et PI3K/AKT, contribuant au remodelage de la matrice extracellulaire, au soutien de l’angiogenèse et au dialogue stroma–épithélium. Une dérégulation de la signalisation PDGF-A/PDGFR a été impliquée dans le remodelage fibrotique et l’activation du stroma associé aux tumeurs, et elle est fréquemment étudiée pour ses effets sur le contrôle du cycle cellulaire et la dynamique du microenvironnement tissulaire. PDGFA est également impliqué dans des processus du développement et dans des modèles de réparation des plaies, où des gradients paracrines de facteurs de croissance orientent le destin cellulaire et la motilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDGFA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDGFA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDGFA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDGF-A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDGFA pour l'étude de la signalisation de PDGF-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDGFA essentiels à la fonction de PDGF-A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDGFA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDGF-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDGF-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDGFA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDGF-A plasmide HDR (h) et le PDGF-A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDGFA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDGFA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.