PCAF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400753-ACT

KAT2BはPCAFをコードしており、PCAFはGNATファミリーに属するヒストンアセチル基転移酵素（HAT）で、ヒストンおよび非ヒストン基質をアセチル化することでクロマチンのアクセス性と転写出力を調節する。PCAFは多タンパク質性の共活性化因子複合体として機能し、転写因子と相互作用して、細胞周期の進行、DNA損傷応答、分化プログラムなどの過程を制御する。アセチル化依存的な遺伝子発現制御を介して、KAT2B/PCAFは炎症性シグナル伝達や腫瘍性の転写ネットワークに関連する経路に寄与する。PCAFの活性または発現の破綻は、複数のがん種を含むさまざまな状況で観察されるエピジェネティック状態の変化や、転写の不均衡を伴う他の疾患と関連づけられている。

PCAF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KAT2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PCAF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KAT2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKAT2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PCAFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKAT2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPCAF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKAT2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPCAF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。