Pax-9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403899

Panoramica

PAX9 codifica il fattore di trascrizione Pax-9 della famiglia paired box, un regolatore nucleare che si lega al DNA ed è essenziale per il patterning embrionale e l’organogenesi. Pax-9 coordina programmi trascrizionali che governano lo sviluppo craniofacciale e faringeo, l’odontogenesi e le interazioni epitelio–mesenchimali, agendo all’interno di reti geniche dello sviluppo più ampie che includono fattori della famiglia PAX e vie dei geni homeobox. Nella genetica umana, un’alterazione della funzione di PAX9 è fortemente associata all’agenesia dentale congenita e ad anomalie craniofacciali correlate, rendendolo un locus chiave per lo studio del controllo trascrizionale dello sviluppo. Nei modelli cellulari, Pax-9 rappresenta un nodo sperimentale facilmente gestibile per analizzare la specificazione di linea, la regolazione genica in risposta ai morfogeni e le cascate di differenziamento a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAX9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAX9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAX9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAX9 per lo studio della segnalazione di Pax-9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAX9 critici per la funzione di Pax-9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAX9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pax-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pax-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAX9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pax-9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAX9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAX9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.