Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PAR4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401142-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PAR4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PAR4 Double-Nickase-Plasmid (h) und PAR4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PAWR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PAR4: sc-1666
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PAR4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAR4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PAWR kodiert das proapoptotische Protein PAR4 (prostate apoptosis response-4), einen mit Tumorsuppressorfunktionen assoziierten Faktor, der intrinsische und extrinsische Apoptosewege moduliert und pro-survivale Signalwege antagonisiert. PAR4 beeinflusst Transkriptions- und Stressantwortprogramme durch Interaktionen mit atypischen PKC-Isoformen, regulatorischen Knotenpunkten von NF-κB sowie der apoptotischen Maschinerie und ist damit an der Kontrolle von Zellschicksalsentscheidungen unter genotoxischem und inflammatorischem Stress beteiligt. Veränderte PAWR/PAR4-Expression wurde in mehreren menschlichen Tumorarten beschrieben und steht mit Änderungen der Apoptoseempfindlichkeit, der zellulären Differenzierung und des metastatischen Verhaltens in Zusammenhang. Über onkologische Kontexte hinaus wird PAR4 auch mit Neurodegeneration und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen fehlregulierter Zelltod und Stresssignalgebung zur Pathologie beitragen.
PAR4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PAWR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PAWR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PAWR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PAWR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.