PAR-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420267

Panoramica

Il gene murino F2rl3 codifica il recettore attivato da proteasi-4 (PAR-4), un recettore accoppiato a proteine G attivato da proteasi seriniche come la trombina attraverso lo smascheramento proteolitico di un ligando “ancorato”. PAR-4 si accoppia principalmente alle vie di segnalazione Gq e G12/13, promuovendo la mobilizzazione intracellulare di Ca2+, il rimodellamento del citoscheletro dipendente da RhoA/ROCK e le risposte a valle delle vie MAPK e NF-κB, che modulano l’attivazione piastrinica, la segnalazione infiammatoria e l’omeostasi vascolare. In contesti immunitari e vascolari, l’attività di F2rl3/PAR-4 contribuisce all’adesione cellulare e alla regolazione della barriera ed è spesso studiata in modelli di trombosi, infiammazione e stress cardiometabolico. Alterazioni della segnalazione di PAR-4 sono state inoltre associate a segnali del microambiente tumorale, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sul crosstalk tra emostasi e infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F2rl3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F2rl3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F2rl3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAR-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F2rl3 per lo studio della segnalazione di PAR-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni F2rl3 critici per la funzione di PAR-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F2rl3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F2rl3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAR-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAR-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F2rl3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F2rl3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.