PAR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-420265-KO-2

Übersicht

F2rl1 kodiert den proteaseaktivierten Rezeptor 2 (PAR-2), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch Spaltung durch Serinproteasen aktiviert wird. Dabei wird ein „tethered ligand“ (gebundener Ligand) freigelegt, der die Signalübertragung über die Signalwege Gq/11, Gi/o und G12/13 auslöst. Die Stimulation von PAR‑2 mobilisiert intrazelluläres Ca2+, aktiviert MAPK/ERK‑ und NF‑κB‑Kaskaden und fördert Transkriptionsprogramme, die mit Zytokinproduktion, Barriere-Regulation und nozizeptiver Sensibilisierung verknüpft sind. In Mausgeweben ist PAR‑2 breit in epithelialen und endothelialen Kompartimenten, Immunzellen und sensorischen Neuronen exprimiert, wo er Entzündungs- sowie Gewebeumbauprozesse koordiniert. Eine fehlregulierte PAR‑2‑Aktivität wurde in Modellen für Atemwegs- und Darmentzündungen, Dermatitis, Schmerz und Signalgebung im Tumormikromilieu beschrieben, was PAR‑2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der proteasegetriebenen Biologie macht.

Das PAR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des F2rl1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des F2rl1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von F2rl1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAR-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von F2rl1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAR-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf F2rl1-Exone abzielen, die für die PAR-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere F2rl1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des F2rl1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAR-2 HDR-Plasmid (m) und PAR-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von F2rl1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten F2rl1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.