Particules Lentivirales d'Activation (h) PAPP-A2: sc-412949-LAC

PAPPA2 code pour la protéine plasmatique associée à la grossesse A2 (PAPP-A2), une métalloprotéinase sécrétée qui clive les protéines de liaison aux facteurs de croissance de type insuline (IGF), en particulier IGFBP-3 et IGFBP-5, augmentant ainsi la biodisponibilité locale des IGF et modulant les voies de signalisation IGF/PI3K-AKT et MAPK. En contrôlant l’accès des ligands IGF, PAPP-A2 influence la croissance cellulaire, la différenciation et les réponses dépendantes du microenvironnement extracellulaire dans de nombreux tissus. Des études génétiques et fonctionnelles associent la dérégulation de PAPPA2 à des phénotypes de croissance modifiés et à des traits liés au système endocrinien en rapport avec un déséquilibre de l’axe IGF, ce qui en fait une cible d’intérêt pour l’étude du développement, du métabolisme et du remodelage tissulaire. Son activité protéolytique extracellulaire relie également PAPPA2 aux recherches sur la biologie des protéases et la régulation des voies sécrétées, dans des contextes physiologiques comme associés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales PAPP-A2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PAPPA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PAPP-A2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PAPPA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PAPP-A2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PAPPA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.