Plásmido CRISPR de Activación (m2) PAI-1/SERPINE1: sc-422287-ACT-2

El gen Serpine1 de ratón codifica el inhibidor del activador del plasminógeno tipo 1 (PAI-1), una serpina secretada que inhibe los activadores del plasminógeno de tipo tisular y de tipo uroquinasa (tPA/uPA) para limitar la generación de plasmina y, de este modo, regular la fibrinólisis, la proteólisis pericelular y la remodelación de la matriz extracelular. PAI-1 integra señales procedentes de TGF-β, citocinas inflamatorias y vías de estrés oxidativo para influir en la adhesión y migración celulares y en la reparación tisular, con efectos posteriores sobre la cicatrización de heridas y la remodelación fibrótica. La desregulación de la expresión de Serpine1/PAI-1 se asocia con fenotipos trombóticos y hemorrágicos, inflamación metabólica vinculada a la obesidad y fibrosis de órganos, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la hemostasia, la biología vascular y la patología inflamatoria crónica. La edición génica o la perturbación de Serpine1 en modelos murinos permite la evaluación funcional del equilibrio proteasa–antiproteasa, el recambio de la matriz y las redes de señalización que acoplan la inflamación con la remodelación, tanto in vivo como en ensayos basados en células.

PAI-1/SERPINE1 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Serpine1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PAI-1/SERPINE1 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Serpine1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Serpine1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PAI-1/SERPINE1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Serpine1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PAI-1/SERPINE1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PAI-1/SERPINE1 en células tumorales con expresión de Serpine1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.