p53 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416469-LAC

TP53 umano codifica p53, un fattore di trascrizione specifico di sequenza che integra il riconoscimento del danno al DNA, lo stress oncogenico e altri insulti cellulari per coordinare l’arresto del ciclo cellulare, l’apoptosi, la senescenza e la riparazione del DNA. p53 governa le principali vie di checkpoint attraverso il controllo trascrizionale di bersagli quali CDKN1A (p21), BAX, PUMA e GADD45, ed è strettamente regolata dal turnover mediato dall’ubiquitina tramite MDM2/MDM4. Interagisce inoltre con i programmi PI3K–AKT, MAPK e di stress metabolico per preservare la stabilità del genoma e limitare la propagazione di cellule danneggiate. La deregolazione della segnalazione di TP53 tramite mutazioni, alterazioni del numero di copie o inibizione a livello di via è una caratteristica centrale della biologia tumorale ed è ampiamente studiata nei meccanismi di instabilità genomica, nei fenotipi di risposta ai trattamenti in sistemi modello e nelle decisioni di destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale p53 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TP53 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale p53 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TP53, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di p53. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TP53 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.