p53 Plasmide Double Nickase (r): sc-437318-NIC
- Specie Target: rat
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p53 Plasmide Double Nickase (r) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p53 Double Nickase Plasmid (r) e il p53 Double Nickase Plasmid (r2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira . Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p53 Plasmide Double Nickase (r) | sc-437318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p53 Plasmide Double Nickase (r2) | sc-437318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il p53 del ratto è un fattore di trascrizione oncosoppressore centrale che salvaguarda l’integrità genomica coordinando il rilevamento del danno al DNA con l’arresto del ciclo cellulare, la senescenza e l’apoptosi. In seguito a stress genotossico, p53 integra i segnali delle vie ATM/ATR e CHK1/CHK2 per modulare programmi trascrizionali che controllano i checkpoint, la riparazione del DNA e la segnalazione apoptotica mitocondriale. La sua attività è strettamente regolata da un feedback negativo con MDM2/MDM4 ed è plasmata da modificazioni post-traduzionali che ne modulano la stabilità e la selettività per i promotori. L’alterazione della sorveglianza dipendente da p53 è fortemente associata alla trasformazione oncogena, a una tolleranza allo stress modificata e a risposte infiammatorie e metaboliche disregolate in modelli rilevanti per la malattia.
p53 Il plasmide Double Nickase (r) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus nelle linee cellulari rat. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di . Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di . Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.