Partículas Lentivirales de Activación (h) P2X6: sc-416264-LAC

P2RX6 codifica el receptor P2X6, un canal catiónico activado por ATP de la familia purinérgica P2X que contribuye a una rápida entrada de Na⁺ y Ca²⁺ y a la despolarización de membrana subsiguiente en células excitables y no excitables. P2X6 puede ensamblarse como subunidad funcional dentro de complejos heteroméricos de receptores P2X, modulando el tráfico del receptor, su cinética y su sensibilidad al ATP. A través de la regulación de la señalización intracelular de calcio, P2X6 influye en vías vinculadas a la neurotransmisión, la comunicación neuroinmunitaria y las respuestas inflamatorias evocadas por estímulos. La señalización purinérgica desregulada que involucra a miembros de la familia P2X se ha asociado con mecanismos de enfermedades neurológicas e inflamatorias, lo que convierte a P2RX6 en un objetivo útil para diseccionar redes de señalización impulsadas por ATP.

Las partículas de activación lentiviral P2X6 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de P2RX6 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral P2X6 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción P2RX6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de P2X6. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo P2RX6 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.