Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p120 Double Nickase Plasmid (h): sc-400943-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das p120 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- p120 Double-Nickase-Plasmid (h) und p120 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTNND1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: p120: sc-23873
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
p120 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400943-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p120 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNND1 kodiert p120-Catenin (p120), ein Armadillo-Repeat-Protein, das an klassischen Cadherinen in Adhärenskontakten bindet und diese stabilisiert, um die Zell-Zell-Adhäsion und die Integrität der epithelialen Barriere zu regulieren. Durch die Modulation des Cadherin-Umsatzes beeinflusst p120 den Umbau von Zellkontakten, die Zytoskelettdynamik sowie die Signalübertragung über GTPasen der Rho-Familie, die Zellpolarität und Motilität koordiniert. CTNND1 ist außerdem mit Wnt/β-Catenin- und wachstumsfaktorresponsiven Signalwegen verknüpft – über seine Rolle bei der Homöostase der Adhärenskontakte und über transkriptionelle Regulation via Kaiso. Eine dysregulierte CTNND1/p120-Funktion und veränderte junctionale Signalgebung sind mit einer abnormalen epithelialen Organisation und invasiven Phänotypen assoziiert, die in der Krebsbiologie und bei Entwicklungsstörungen untersucht werden.
p120 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTNND1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTNND1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTNND1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTNND1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.