p107 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422614

Panoramica

Il gene murino Rbl1 codifica la proteina della famiglia del retinoblastoma p107, un regolatore del ciclo cellulare che limita la progressione G1/S legandosi ai fattori di trascrizione E2F e coordinando la segnalazione delle chinasi ciclina-dipendenti. p107 integra segnali mitogeni con il controllo trascrizionale della replicazione del DNA e dell’ingresso in fase S, e contribuisce all’applicazione dei checkpoint e ai programmi di differenziamento cellulare. Come parte della via di segnalazione RB, la funzione di p107 interseca le reti di pRB/p130 per modulare la repressione associata alla cromatina e le decisioni proliferative. La deregolazione del controllo esercitato dalla famiglia RB e dell’attività di E2F è ampiamente rilevante per i modelli di trasformazione oncogenica e per gli studi sulla proliferazione aberrante e sull’impegno di linea nei tessuti dei mammiferi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p107 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rbl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rbl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rbl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p107.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rbl1 per lo studio della segnalazione di p107, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rbl1 critici per la funzione di p107
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rbl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p107 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal p107 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rbl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p107 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR p107 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rbl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rbl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.