OTUB2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413099

Panoramica

OTUB2 (OTU deubiquitinase, ubiquitin aldehyde binding 2) codifica una deubiquitinasi a proteasi cisteinica che modula i segnali di ubiquitina per regolare la stabilità proteica e l’intensità della segnalazione. Tagliando preferenzialmente specifiche tipologie di legami delle catene di ubiquitina, OTUB2 influenza vie dipendenti dall’ubiquitina che controllano la proteostasi, le risposte al danno al DNA e le cascate di segnalazione adattative allo stress. Un’attività alterata di OTUB2 è stata associata a una disregolazione dell’omeostasi dell’ubiquitina osservata in molteplici contesti patologici, inclusi programmi di segnalazione oncogenica e la patobiologia infiammatoria. Di conseguenza, OTUB2 è spesso studiata per il suo impatto sul crosstalk tra ubiquitinazione, controllo trascrizionale e decisioni cellulari di sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUB2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OTUB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OTUB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OTUB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OTUB2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OTUB2 per lo studio della segnalazione di OTUB2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OTUB2 critici per la funzione di OTUB2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OTUB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OTUB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OTUB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OTUB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OTUB2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OTUB2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OTUB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OTUB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.