Plásmido CRISPR de Activación (h) OSR1: sc-406034-ACT

El OSR1 humano (odd-skipped related transcription factor 1) codifica una proteína de unión al ADN con dedos de zinc que regula decisiones sobre el destino celular y programas de patrón durante el desarrollo embrionario, con funciones destacadas en la especificación del mesodermo intermedio y la organogénesis. OSR1 actúa como regulador transcripcional que interactúa con redes génicas impulsadas por morfógenos, incluidas vías influenciadas por la señalización WNT y BMP, para controlar la diferenciación, la migración y la morfogénesis tisular. La expresión alterada de OSR1 se ha asociado con anomalías del desarrollo y con programas de linaje desregulados en contextos relevantes para la enfermedad, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la identidad celular. In vitro, OSR1 se investiga con frecuencia en modelos de diferenciación epitelial y desarrollo de organoides, donde la dosis del factor de transcripción puede reconfigurar circuitos reguladores.

OSR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OSR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OSR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OSR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OSR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OSR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OSR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OSR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OSR1 en células tumorales con expresión de OSR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.