Orexin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400357

概要

HCRTはプレプロオレキシンをコードしており、これはプロセシングを受けて、OX1R/HCRTR1およびOX2R/HCRTR2を介するGPCRシグナル伝達によって作用する神経ペプチドのオレキシンA（ヒポクレチン-1）とオレキシンBへと変換されます。オレキシンAは覚醒と警戒の重要な調節因子であり、視床下部および脳幹回路において、cAMP/PKA経路、Ca2+依存性経路、ならびにMAPK/ERKに連結した経路を通じて、神経細胞の代謝状態をシナプス興奮性に結び付けます。睡眠―覚醒の切り替えを調節するだけでなく、オレキシンシグナルは摂食行動、報酬処理、ストレス応答、自律神経出力にも影響します。HCRT/オレキシン軸の機能異常は睡眠―覚醒障害と関連し、代謝研究および精神疾患研究に関係する神経行動学的表現型の形成にも寄与します。

Orexin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHCRT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HCRT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HCRTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Orexin-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Orexin-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HCRT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Orexin-Aの機能に不可欠なHCRTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HCRTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Orexin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびOrexin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HCRT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Orexin-A HDRプラスミド（h）および Orexin-A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHCRTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHCRT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。