Orexin-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400357

Panoramica

HCRT codifica la prepro-orexina, che viene processata nei neuropeptidi orexina-A (ipocretina-1) e orexina-B, i quali agiscono attraverso la segnalazione dei GPCR OX1R/HCRTR1 e OX2R/HCRTR2. L’orexina-A è un modulatore chiave dell’arousal e della vigilanza, collegando lo stato metabolico neuronale all’eccitabilità sinaptica tramite vie dipendenti da cAMP/PKA, da Ca2+ e associate a MAPK/ERK, in circuiti ipotalamici e del tronco encefalico. Oltre a regolare le transizioni sonno–veglia, la segnalazione dell’orexina influenza il comportamento alimentare, l’elaborazione della ricompensa, le risposte allo stress e l’output autonomico. La disregolazione dell’asse HCRT/orexina è associata a disturbi sonno–veglia e contribuisce a fenotipi neurocomportamentali rilevanti per la ricerca metabolica e psichiatrica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Orexin-A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HCRT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HCRT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HCRT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Orexin-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HCRT per lo studio della segnalazione di Orexin-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HCRT critici per la funzione di Orexin-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HCRT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Orexin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Orexin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HCRT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Orexin-A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Orexin-A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HCRT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HCRT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.