OC-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404081-ACT

ONECUT2 (OC-2) codifica um fator de transcrição homeobox que regula a especificação de linhagem e programas de diferenciação, particularmente em contextos endodérmicos e epiteliais. Como regulador de ligação ao DNA, o OC-2 coordena redes transcricionais que controlam a identidade celular, a proliferação e o padrão de desenvolvimento, interagindo com a maquinaria mais ampla de cromatina e transcrição. A expressão desregulada de ONECUT2 tem sido associada a estados alterados de expressão gênica relacionados a fenótipos oncogênicos, incluindo mudanças no controle do crescimento, em programas ligados à invasão e na plasticidade celular. Essas propriedades tornam o ONECUT2 um alvo útil para o estudo de circuitos transcricionais, regulação epigenética e transições de estado relevantes para doenças em modelos de células humanas.

OC-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ONECUT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OC-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ONECUT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ONECUT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OC-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ONECUT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OC-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OC-2 em células tumorais com expressão de ONECUT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.