Nup153 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403206-ACT

ヒトのNUP153は、核膜孔複合体を構成する動的なヌクレオポリンであるNup153をコードしており、核内輸送、孔の組み立て、ならびに核バスケット構造の形成・維持に寄与する。Nup153はカリオフェリン介在性のインポート／エクスポート経路と相互作用し、核周辺部での相互作用を統合することでクロマチンの配置や転写プログラムにも影響を及ぼす。核—細胞質間輸送および核膜関連の遺伝子制御を調節することにより、NUP153は細胞周期の進行とゲノム維持過程を支える。Nup153関連ネットワークを含む核内輸送因子の機能異常は、増殖シグナル、ストレス応答、疾患に関連する核構造の変化といった文脈で頻繁に研究されている。

Nup153 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUP153の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nup153 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUP153 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUP153転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nup153の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUP153遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNup153依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUP153発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNup153経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。