Plásmido Doble Nickase (h) NTCP: sc-400840-NIC

SLC10A1 codifica el polipéptido cotransportador de sodio/taurocolato (NTCP), un transportador de la membrana basolateral de los hepatocitos que media la captación dependiente de sodio de ácidos biliares conjugados y otros aniones orgánicos desde la sangre portal. La actividad de NTCP es fundamental para la circulación enterohepática de los ácidos biliares e influye en redes de señalización intracelular activadas por ácidos biliares, incluidos programas transcripcionales regulados por FXR que acoplan el transporte a la homeostasis metabólica. Las alteraciones en la función de SLC10A1/NTCP pueden perturbar el manejo de los ácidos biliares y la fisiología hepática, proporcionando un vínculo mecanístico con fenotipos colestásicos y con una desregulación más amplia del metabolismo de lípidos y glucosa. NTCP también actúa como factor del hospedador para la entrada de patógenos en los hepatocitos, lo que lo hace relevante para estudios de la biología de infecciones hepatotrópicas y de procesos de captación mediados por receptores.

NTCP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC10A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC10A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC10A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC10A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.