NSUN6 Plasmide Double Nickase (h): sc-415118-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NSUN6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NSUN6 Double Nickase Plasmid (h) e il NSUN6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NSUN6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NSUN6 Antibody (D-5): sc-393446
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NSUN6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415118-NIC | 20 µg | $410.00 |
NSUN6 codifica una metiltransferasi dell’RNA citosina-5 che installa modifiche m5C su specifici substrati di RNA, contribuendo al controllo epitranscrittomico della stabilità, del processamento e della traduzione dell’RNA. Attraverso la regolazione dei pattern di modificazione dell’RNA, NSUN6 può influenzare programmi di espressione genica associati ai ribosomi e reti post-trascrizionali più ampie che modellano la crescita cellulare e le risposte allo stress. Alterazioni del panorama di metilazione dell’RNA che coinvolgono enzimi della famiglia NSUN sono state collegate a differenziazione disregolata e a segnali oncogenici, rendendo NSUN6 un nodo utile per studiare come i segni m5C influenzino il fenotipo. Le ricerche su NSUN6 supportano indagini meccanicistiche su vie guidate dalle modificazioni dell’RNA nella biologia del cancro e in altre condizioni in cui il metabolismo dell’RNA è perturbato.
NSUN6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NSUN6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NSUN6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NSUN6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NSUN6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.