Nrf1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401053-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nrf1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nrf1 Double Nickase Plasmid (h) e il Nrf1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NFE2L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nrf1 Antibody (G-5): sc-515360
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nrf1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401053-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401053-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L1 codifica il fattore di trascrizione Nrf1, un regolatore CNC-bZIP ancorato alla membrana che integra la proteostasi con l’omeostasi redox cellulare. In condizioni di stress del proteasoma, Nrf1 va incontro a un processamento associato al RE (reticolo endoplasmatico) e trasloca nel nucleo per indurre i geni delle subunità del proteasoma e altri programmi di detossificazione tramite elementi di risposta antiossidante, coordinando la capacità del sistema ubiquitina–proteasoma, il metabolismo lipidico e l’adattamento allo stress. La segnalazione di Nrf1 interseca i circuiti NRF2/KEAP1, la risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e vie metaboliche che modulano le risposte a danno infiammatorio e ossidativo. La disregolazione della trascrizione dipendente da Nrf1 è stata collegata ad alterazioni della funzione del proteasoma, squilibri metabolici e contributi dipendenti dal contesto a fenotipi oncogenici e neurodegenerativi, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul controllo qualità delle proteine.
Nrf1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NFE2L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NFE2L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NFE2L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NFE2L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.