Plásmido CRISPR de Activación (h2) NRF-1: sc-400938-ACT-2

El gen humano NRF1 codifica el factor respiratorio nuclear 1 (NRF-1), un factor de transcripción específico de secuencia que coordina la expresión de genes mitocondriales codificados en el núcleo, incluidos componentes de la cadena de transporte de electrones, la maquinaria de transcripción/replicación mitocondrial (p. ej., TFAM) y factores que respaldan la fosforilación oxidativa y la biogénesis mitocondrial. NRF-1 integra señales celulares de energía y del estado redox con programas de crecimiento celular al regular redes transcripcionales vinculadas a la proteostasis, la biosíntesis de hemo y la comunicación mitocondria–núcleo, influyendo así en la remodelación metabólica y la adaptación al estrés. La actividad desregulada de NRF1/NRF-1 se ha asociado con disfunción mitocondrial y una bioenergética alterada observadas en contextos de neurodegeneración, trastornos cardiometabólicos y cáncer. La edición genética o la perturbación de NRF1 permite estudios mecanísticos de la regulación génica mitocondrial, la capacidad respiratoria y los circuitos transcripcionales en modelos de células humanas, incluido el mapeo de vías y los análisis de genotipo–fenotipo mediante lecturas ómicas.

NRF-1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NRF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NRF-1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NRF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NRF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NRF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NRF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NRF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NRF-1 en células tumorales con expresión de NRF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.