NRAMP 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418176-ACT

O SLC11A2 humano codifica a NRAMP2 (também conhecida como DMT1), um transportador de metais divalentes acoplado a prótons que medeia a captação celular de ferro ferroso e de outros metais de transição através das membranas endossomais e da membrana plasmática. Ao controlar o influxo de ferro a partir de endossomos contendo transferrina e das vias de absorção dietética, a NRAMP2 ajuda a manter a disponibilidade de ferro no citosol para a síntese de heme, a respiração mitocondrial e a biogênese de clusters ferro‑enxofre, ao mesmo tempo em que influencia o equilíbrio redox. Alterações na atividade do SLC11A2 modificam a homeostase do ferro e a sinalização de estresse oxidativo, com relevância documentada para distúrbios do metabolismo do ferro, como anemia microcítica e fenótipos de sobrecarga sistêmica de ferro. A função da NRAMP2 também é estudada no contexto do manuseio de metais em macrófagos e da vulnerabilidade neuronal ligada ao estresse celular dependente de ferro.

NRAMP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC11A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NRAMP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC11A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC11A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NRAMP 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC11A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NRAMP 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NRAMP 2 em células tumorais com expressão de SLC11A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.