Nova-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404452-ACT

Das humane **NOVA2**-Gen kodiert **Nova-2**, ein in Neuronen angereichertes RNA-bindendes Protein, das **YCAY**-Motive erkennt, um alternatives Spleißen und andere posttranskriptionelle Ereignisse der RNA-Prozessierung zu regulieren. Nova-2 prägt die neuronale Differenzierung und synaptische Funktion, indem es die Ein- und Ausschleusung von Exons über Netzwerke von Transkripten koordiniert, die an Neuritenauswuchs, Zytoskelettdynamik und Neurotransmission beteiligt sind. Über diese Spleißprogramme trägt NOVA2 zur Aufrechterhaltung der Integrität neuronaler Schaltkreise sowie zur aktivitätsabhängigen Genregulation bei. Eine Fehlregulation oder pathogene Variation in NOVA2 wurde mit neurodevelopmentalen Phänotypen und neurologischen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der RNA-Prozessierung im Nervensystem macht.

Nova-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NOVA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nova-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NOVA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NOVA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nova-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NOVA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nova-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nova-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NOVA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.