Notch 3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421933-LAC

Notch3 codifica Notch 3, un recettore transmembrana a singolo passaggio che media la segnalazione juxtacrina, controllando le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e l’omeostasi tissutale. Dopo il legame con il ligando, la proteolisi rilascia il dominio intracellulare di Notch, che regola programmi trascrizionali tramite complessi RBPJ/CSL, integrandosi con vie che governano proliferazione e determinazione di linea. Nei sistemi murini, l’attività di Notch3 è particolarmente rilevante per la biologia della muscolatura liscia vascolare, i processi di neurosviluppo e la funzione delle cellule immunitarie; inoltre, una segnalazione deregolata è ampiamente utilizzata come asse modello per studiare fenotipi oncogenici e dello sviluppo dipendenti dal contesto. Poiché la segnalazione di Notch dipende in modo marcato da dose e tempistica, una modulazione precisa del Notch3 endogeno è importante per analizzare il cross-talk tra vie e la dinamica delle reti trascrizionali.

Le particelle di attivazione lentivirale Notch 3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Notch3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Notch 3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Notch3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Notch 3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Notch3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.