Plasmide CRISPR d'Activation (h) Notch 2: sc-401323-ACT

NOTCH2 code Notch 2, un récepteur transmembranaire à passage unique qui assure une signalisation juxtacrine contrôlant les décisions de destinée cellulaire, l’engagement de lignée et l’homéostasie tissulaire. Après liaison à un ligand (p. ex. JAGGED/Delta-like), un clivage protéolytique libère le domaine intracellulaire de Notch, qui régule la transcription avec CSL/RBPJ et des coactivateurs, en s’intégrant à des voies telles que Wnt, TGF-β et NF-κB. L’activité de Notch 2 influence l’équilibre prolifération–différenciation, le maintien des cellules souches/progénitrices et le développement des cellules immunitaires, avec des effets dépendant du contexte selon les systèmes d’organes. Une signalisation NOTCH2 dysrégulée est associée à des troubles du développement et a été impliquée dans des processus oncogéniques et inflammatoires, ce qui soutient son étude dans la différenciation, la signalisation du microenvironnement et la modélisation des maladies.

Notch 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOTCH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Notch 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOTCH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOTCH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Notch 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOTCH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Notch 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Notch 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOTCH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.