Nocturnin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405350-ACT

O NOCT humano codifica a Nocturnina, uma deadenilase do tipo CCR4 regulada pelo ritmo circadiano, que encurta caudas poli(A) para controlar a estabilidade do mRNA e a produção translacional. A Nocturnina ajuda a conectar o circuito do relógio biológico a programas gênicos metabólicos, influenciando vias relacionadas ao metabolismo de lipídios, ao balanço energético e à transcrição responsiva a nutrientes. Por meio do remodelamento pós-transcricional de transcritos, o NOCT contribui para a regulação rítmica da homeostase celular e da adaptação ao estresse. A desregulação da expressão ou da atividade de NOCT tem sido associada a fenótipos metabólicos alterados e vem sendo explorada no contexto de programas de expressão gênica relacionados à inflamação e ao câncer.

Nocturnin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOCT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nocturnin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOCT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOCT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nocturnin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOCT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nocturnin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nocturnin em células tumorais com expressão de NOCT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.