NKp44 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407295-ACT

NCR2 umano codifica NKp44, un recettore attivante delle cellule natural killer (NK) espresso sulle cellule NK attivate e su alcune cellule linfoidi innate, che contribuisce a integrare i segnali di sorveglianza immunitaria sulla superficie cellulare. NKp44 riconosce diversi ligandi presenti su cellule stressate, infette o trasformate e trasduce l’attivazione tramite una segnalazione dipendente da adattatori, favorendo il rilascio di granuli citotossici e la produzione di citochine. Questo recettore partecipa a vie che controllano il riconoscimento dell’immunità innata, la segnalazione basata su motivi tirosinici degli immunorecettori e la regolazione delle risposte infiammatorie. Un’attività e un’espressione deregolate di NCR2/NKp44 sono state associate ad alterazioni della funzione delle cellule NK in contesti quali infezioni virali, immunologia dei tumori e meccanismi di malattie infiammatorie croniche.

NKp44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NCR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NKp44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NCR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NCR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NKp44. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NCR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NKp44 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NKp44 nelle cellule tumorali con espressione di NCR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.