NKp44 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407295-ACT

O NCR2 humano codifica o NKp44, um recetor ativador de células natural killer (NK), expresso em células NK ativadas e em certos tipos de células linfoides inatas, que ajuda a integrar sinais de vigilância imunitária à superfície celular. O NKp44 liga-se a diversos ligandos presentes em células sob stresse, infetadas ou transformadas e transmite sinais de ativação através de sinalização dependente de adaptadores, contribuindo para a libertação de grânulos citotóxicos e para a produção de citocinas. Este recetor participa em vias que controlam o reconhecimento imunitário inato, a sinalização baseada em motivos tirosina de recetores imunitários e a regulação das respostas inflamatórias. A atividade e os padrões de expressão desregulados do NCR2/NKp44 têm sido associados a alterações da função das células NK em contextos como infeções virais, imunologia tumoral e mecanismos de doença inflamatória crónica.

NKp44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NKp44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NKp44. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NKp44 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NKp44 em células tumorais com expressão de NCR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.