Plásmido CRISPR de Activación (h) NKp30: sc-403117-ACT

NCR3 codifica NKp30, un receptor activador expresado en las células asesinas naturales (NK) y en subpoblaciones de células T de tipo innato, que contribuye a la vigilancia inmunitaria mediante el reconocimiento de ligandos inducidos por estrés en células diana. La unión de NKp30 desencadena señalización dependiente de ITAM a través de moléculas adaptadoras asociadas, promoviendo vías posteriores como la activación de SYK/ZAP70, el flujo de calcio, la señalización MAPK, la exocitosis de gránulos citotóxicos y la producción de citocinas. Las alteraciones en la expresión o la función de NCR3/NKp30 se han vinculado a diferencias en la capacidad de respuesta de las células NK en microambientes tumorales y durante infecciones virales, y se estudian con frecuencia en el contexto de la evasión inmunitaria y la inflamación. Como receptor de superficie central para la activación efectora innata, NKp30 constituye un punto de intervención accesible para analizar umbrales de señalización y la biología receptor–ligando en células inmunitarias humanas.

NKp30 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NKp30 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NKp30. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NKp30 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NKp30 en células tumorales con expresión de NCR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.