NGAL Plasmide Double Nickase (h): sc-401838-NIC

LCN2 codifica la lipocalina associata alla gelatinasi dei neutrofili (NGAL), una lipocalina secreta che lega il ferro associato ai siderofori e modula il traffico del ferro, la difesa antimicrobica e le risposte allo stress epiteliale. NGAL partecipa alla segnalazione dell’immunità innata e al rimodellamento infiammatorio, intersecando vie che controllano la chemiotassi, le reti di citochine e la dinamica della matrice extracellulare attraverso interazioni con partner come MMP9. Nei tessuti umani, un’alterata espressione di LCN2/NGAL è frequentemente associata all’infiammazione metabolica, alle risposte a danno renale e cardiovascolare e alla comunicazione tra tumore e stroma, rendendola un utile indicatore di programmi adattativi allo stress. Queste caratteristiche supportano studi meccanicistici sullo stress ossidativo dipendente dal ferro, sul crosstalk epitelio–immunitario e sulla regolazione del microambiente.

NGAL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LCN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LCN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LCN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LCN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.