NFKBIA/IkB alpha Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421878

Panoramica

Nfkbia codifica l’inibitore alfa di NF-κB (IκBα), un importante regolatore negativo della segnalazione canonica di NF-κB che si lega ai complessi RelA/p50 e li trattiene nel citoplasma in condizioni basali. In seguito a stimolazione da parte di citochine pro-infiammatorie, ligandi dei recettori Toll-like o segnalazione del recettore dell’antigene, IκBα viene fosforilata dal complesso IKK e degradata, consentendo la traslocazione nucleare di NF-κB e la trascrizione di geni coinvolti nell’immunità, nella risposta allo stress e nella sopravvivenza cellulare. Questo circuito di feedback modula l’attivazione dell’immunità innata e adattativa, la produzione di citochine e le decisioni sul destino cellulare, ed è ampiamente utilizzato come punto d’ingresso meccanicistico per studiare il rimodellamento tissutale guidato dall’infiammazione e la segnalazione oncogenica. Nei sistemi murini, la perturbazione di NFKBIA è comunemente sfruttata per analizzare il cross-talk della via con i programmi MAPK, interferone e apoptosi in modelli di disregolazione immunitaria e di segnalazione del microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NFKBIA/IkB alpha (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nfkbia in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nfkbia insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nfkbia a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NFKBIA/IkB alpha.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nfkbia per lo studio della segnalazione di NFKBIA/IkB alpha, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nfkbia critici per la funzione di NFKBIA/IkB alpha
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nfkbia per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nfkbia. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NFKBIA/IkB alpha Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NFKBIA/IkB alpha (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nfkbia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nfkbia definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.