Plásmido Doble Nickase (h) NFκB p52/p100/NFKB2: sc-400418-NIC

NFKB2 codifica el precursor NFκB p100, que se procesa para generar la subunidad p52, un regulador transcripcional central en la vía no canónica de NF-κB. Mediante el procesamiento regulado de p100 aguas abajo de receptores como BAFFR, CD40 y LTβR, NFKB2 controla la maduración de los linfocitos B, la organogénesis linfoide, la señalización de citocinas y programas de supervivencia. Su actividad se integra con la señalización IKKα–NIK, dímeros que contienen RelB y la comunicación cruzada con respuestas canónicas de NF-κB para modular la expresión génica inflamatoria e inmunitaria. La desregulación de la señalización de NFKB2 se ha asociado con disfunción inmunitaria y con la biología de neoplasias malignas linfoides, lo que lo convierte en un objetivo frecuente de estudios mecanísticos sobre señalización, control transcripcional y decisiones de destino celular.

NFκB p52/p100/NFKB2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NFKB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NFKB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NFKB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NFKB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.