NFATc1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421863-LAC

Nfatc1 codifica NFATc1, un fattore di trascrizione regolato dal calcio e attivato a valle della calcineurina in seguito all’ingresso di Ca²⁺. NFATc1 coordina programmi di espressione genica coinvolti nell’attivazione e nella differenziazione delle cellule immunitarie, integra segnali provenienti dal recettore dei linfociti T e dalle vie delle citochine e coopera con AP-1 per controllare gli output trascrizionali. Nei sistemi murini, NFATc1 è anche un regolatore chiave dell’osteoclastogenesi e del rimodellamento osseo attraverso la segnalazione indotta da RANKL, collegando questo fattore a processi infiammatori e fenotipi scheletrici. Un’attività deregolata di NFATc1 è stata implicata in risposte immunitarie aberranti e nel rimodellamento patologico dei tessuti, rendendolo un nodo di grande valore per studi meccanicistici sull’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione.

Le particelle di attivazione lentivirale NFATc1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Nfatc1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NFATc1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Nfatc1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NFATc1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Nfatc1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.