Neutrophil Elastase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400677

Panoramica

ELANE codifica l’elastasi dei neutrofili, una serina proteasi associata ai granuli che viene rilasciata durante la degranulazione dei neutrofili e la formazione delle NET per scindere le proteine della matrice extracellulare e inattivare i fattori di virulenza microbica. La sua attività si integra con la segnalazione dell’immunità innata, l’equilibrio proteasi–antiproteasi e le cascate infiammatorie che modulano il reclutamento dei leucociti e il rimodellamento tissutale. Una funzione disregolata dell’elastasi dei neutrofili contribuisce a una proteolisi aberrante e a stress ossidativo/infiammatorio nei microambienti delle vie aeree e del sistema vascolare, e le varianti di ELANE sono associate a fenotipi di neutropenia congenita con maturazione mieloide compromessa. Di conseguenza, ELANE è ampiamente studiato nella biologia dei neutrofili, nelle interazioni ospite–patogeno e nei meccanismi che collegano la granulopoiesi al danno tissutale infiammatorio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Neutrophil Elastase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELANE in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELANE insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELANE a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Neutrophil Elastase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELANE per lo studio della segnalazione di Neutrophil Elastase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELANE critici per la funzione di Neutrophil Elastase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELANE per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELANE. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Neutrophil Elastase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Neutrophil Elastase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELANE per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELANE definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.