Neurogranin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404119-ACT

O NRGN humano codifica a neurogranina, uma proteína pós-sináptica ligadora de calmodulina, enriquecida nas espinhas dendríticas, que ajusta a disponibilidade de Ca2+/calmodulina e sustenta a sinalização sináptica dependente da atividade. Ao modular a dinâmica de fosforilação dependente de CaMKII e programas de plasticidade a jusante, a neurogranina contribui para a potenciação de longa duração (LTP), a remodelação de espinhas e a maturação de circuitos neuronais. A expressão de NRGN e o estado de fosforilação da neurogranina estão ligados à transmissão glutamatérgica e a vias mais amplas que governam aprendizagem e memória, incluindo respostas transcricionais reguladas por CREB. A desregulação da biologia da neurogranina tem sido associada a fenótipos relevantes para doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de disfunção sináptica.

Neurogranin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRGN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurogranin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRGN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRGN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurogranin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRGN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurogranin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurogranin em células tumorais com expressão de NRGN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.