NERF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405891

Panoramica

ELF2 codifica NERF, un fattore di trascrizione della famiglia ETS che si lega a motivi di DNA ricchi di purine per regolare programmi di espressione genica che controllano la differenziazione ematopoietica, l’attivazione delle cellule immunitarie e reti trascrizionali specifiche di linea. NERF partecipa alla trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II e coopera con altri fattori di trascrizione e regolatori della cromatina per modulare l’attività di promotori ed enhancer. Una deregolazione della segnalazione ELF2/NERF è stata associata ad alterazioni delle vie di proliferazione e sopravvivenza in contesti ematologici, sostenendo il suo studio nella leucemogenesi e nella disregolazione immunitaria. In quanto fattore regolatorio nucleare, NERF viene anche utilizzato come nodo per analizzare i circuiti trascrizionali guidati dagli ETS e il rimodellamento delle vie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NERF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NERF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELF2 per lo studio della segnalazione di NERF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELF2 critici per la funzione di NERF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NERF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NERF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NERF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NERF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.