NELF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-437310

Panoramica

Nsmf codifica NELF (fattore embrionale nasale LHRH), una proteina associata ai processi di guida, implicata nella migrazione neuronale e nell’orientamento degli assoni durante lo sviluppo. Nel topo, NELF è collegato a processi che coordinano la crescita dei neuriti, lo sviluppo del sistema olfattivo/vomeronasale e la formazione dei circuiti neuroendocrini ipotalamici. Un’alterazione della funzione di NSMF/NELF è stata associata all’ipogonadismo ipogonadotropo congenito e a fenotipi correlati alla sindrome di Kallmann, a riflesso di ruoli nello sviluppo dei neuroni GnRH e nella regolazione dell’asse riproduttivo. Queste caratteristiche rendono Nsmf un bersaglio utile per studiare la neurobiologia dello sviluppo, la segnalazione neuroendocrina e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli di differenziazione neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NELF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nsmf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nsmf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nsmf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NELF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nsmf per lo studio della segnalazione di NELF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nsmf critici per la funzione di NELF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nsmf per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NELF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NELF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nsmf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NELF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NELF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nsmf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nsmf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.