Plásmido CRISPR de Activación (h) NELF-B: sc-405667-ACT

El gen humano **NELFB** codifica **NELF-B**, una subunidad central del complejo **Factor de Elongación Negativa (NELF)**, que coopera con **DSIF** para imponer la pausa proximal al promotor de la **ARN polimerasa II** y moldear la elongación temprana de la transcripción. Al regular la liberación de la pausa y la cinética transcripcional, NELF-B influye en programas génicos sensibles a estímulos, en la comunicación entre potenciadores y promotores, y en un control más amplio de la expresión génica vinculado a la cromatina. La pausa dependiente de NELF está estrechamente conectada con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés, lo que hace que la función de NELFB sea relevante para estudios mecanísticos de la desregulación transcripcional. La regulación alterada del control de la elongación se ha implicado en diversos contextos de enfermedad, lo que respalda el uso de la perturbación de NELFB para modelar cómo la dinámica de la pausa impacta en fenotipos aguas abajo.

NELF-B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NELFB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NELF-B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NELFB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NELFB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NELF-B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NELFB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NELF-B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NELF-B en células tumorales con expresión de NELFB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.