Plasmide CRISPR d'Activation (m) NEGR1: sc-435831-ACT

Negr1 code le régulateur de croissance neuronale 1 (NEGR1), une molécule d’adhérence cellulaire de la famille IgLON ancrée au GPI, enrichie à la surface des neurones, où elle favorise l’extension des neurites, l’organisation synaptique et la maturation des circuits. Dans des modèles murins du système nerveux, NEGR1 est associée à une connectivité dépendante de l’activité et à une signalisation au niveau des microdomaines membranaires qui influence le guidage axonal et la dynamique des épines dendritiques. Une expression altérée de NEGR1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et des études génétiques ont relié des loci de NEGR1 à la régulation du poids corporel et à des traits comportementaux. Ces caractéristiques font de NEGR1 un nœud d’intérêt pour étudier la signalisation médiée par l’adhérence, la plasticité structurelle et les relations génotype–phénotype dans des contextes de recherche sur le cerveau et le métabolisme.

NEGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Negr1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NEGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Negr1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Negr1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NEGR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Negr1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NEGR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NEGR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Negr1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.