NDUFS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416401-ACT

NDUFS1は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）の中核サブユニットをコードしており、NADHからユビキノンへの電子伝達に寄与するとともに、ミトコンドリア内膜を介したプロトンポンプ機能を支えます。酸化的リン酸化における役割を通じて、NDUFS1はミトコンドリア膜電位、ATP産生、細胞の酸化還元恒常性に影響を与え、代謝適応や活性酸素種（ROS）の制御とも関連します。複合体I機能の変化はミトコンドリア機能障害の表現型と関連しており、神経筋疾患や神経変性疾患、ならびに代謝ストレス応答の文脈で研究されてきました。そのためNDUFS1は、電子伝達系の健全性がバイオエネルゲティクス、ミトコンドリアシグナル伝達、ストレス経路の活性化にどのように影響するかを探るうえで有用な標的です。

NDUFS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDUFS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NDUFS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDUFS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDUFS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NDUFS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDUFS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNDUFS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDUFS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNDUFS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。