Plasmide CRISPR/Cas9 KO NDST1 (h): sc-404078

Présentation

NDST1 (N‑désacétylase/N‑sulfotransférase 1) est une enzyme clé résidente de l’appareil de Golgi qui initie et propage la N‑sulfatation au cours de la biosynthèse des protéoglycanes à héparane sulfate, en façonnant les profils de sulfatation qui déterminent la spécificité de liaison des ligands. En contrôlant la structure de l’héparane sulfate, NDST1 module l’organisation de la matrice extracellulaire et la fonction des co‑récepteurs de surface cellulaire, lesquelles influencent des voies de signalisation de facteurs de croissance et de morphogènes, notamment les axes FGF, WNT, Hedgehog et VEGF. Ces interactions dépendantes de la sulfatation affectent les programmes d’adhésion, de migration et de différenciation cellulaires, essentiels au développement et à l’homéostasie tissulaire. Une activité dérégulée de NDST1 et une composition altérée de l’héparane sulfate ont été associées à diverses physiopathologies, notamment le remodelage du microenvironnement tumoral, des signalisations liées à la fibrose et des phénotypes neurodéveloppementaux, faisant de NDST1 une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation pilotée par le glycocalyx.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NDST1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NDST1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NDST1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NDST1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NDST1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NDST1 pour l'étude de la signalisation de NDST1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NDST1 essentiels à la fonction de NDST1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NDST1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NDST1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NDST1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NDST1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NDST1 plasmide HDR (h) et le NDST1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NDST1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NDST1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.