Particules Lentivirales d'Activation (h) NDRG1: sc-402294-LAC

NDRG1 (N-myc downstream regulated gene 1) code une protéine cytoplasmique qui participe aux réponses au stress cellulaire, à la différenciation et à la régulation de la prolifération. NDRG1 a été associé au contrôle du trafic membranaire et à l’organisation du cytosquelette, avec des effets en aval sur la plasticité épithélio-mésenchymateuse, la migration et des programmes de signalisation liés à l’adhérence. Son expression répond à l’hypoxie et à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier l’adaptation transcriptionnelle au stress du microenvironnement. Une dérégulation de NDRG1 a été rapportée dans de multiples modèles de maladie, notamment en biologie du cancer et dans les neuropathies périphériques, ce qui soutient des études mécanistiques de la régulation des états cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales NDRG1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NDRG1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NDRG1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NDRG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NDRG1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NDRG1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.