NCX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403352-ACT

SLC8A2 codifica lo scambiatore umano Na⁺/Ca²⁺ NCX2, un antiporter della membrana plasmatica che accoppia il gradiente di Na⁺ all’estrusione di Ca²⁺ oppure, in specifiche condizioni elettrochimiche, all’ingresso di Ca²⁺. Modellando la dinamica del Ca²⁺ citosolico, NCX2 influenza la segnalazione dipendente dall’attività, l’eccitabilità di membrana e l’attivazione di enzimi Ca²⁺-dipendenti, integrandosi con vie che regolano la trasmissione sinaptica e l’omeostasi neuronale. Alterazioni dello scambio sodio–calcio possono perturbare la gestione del Ca²⁺ e la resilienza cellulare allo stress ionico, rendendo SLC8A2 un bersaglio rilevante per lo studio di meccanismi associati a disfunzioni neurologiche e neurodegenerazione. Il suo profilo di espressione arricchito nei neuroni supporta inoltre studi sulla regolazione del Ca²⁺ specifica per regione e per tipo cellulare in sistemi modello umani.

NCX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC8A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NCX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC8A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC8A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NCX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC8A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NCX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NCX2 nelle cellule tumorali con espressione di SLC8A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.