NALP9A Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-433227-ACT

Il gene murino **Nlrp9a** codifica **NALP9A**, un membro della famiglia dei recettori di tipo NOD (NLR) coinvolto nel riconoscimento immunitario innato e nella segnalazione correlata agli inflammasomi. Come altre proteine NLR contenenti un dominio pirinico, NALP9A è associata a vie che regolano l’attivazione delle caspasi, la maturazione delle citochine infiammatorie e programmi di morte cellulare sensibili allo stress. L’espressione di **Nlrp9a** è stata collegata a tessuti epiteliali e riproduttivi, suggerendo un ruolo nella sorveglianza immunitaria associata alle barriere e in processi infiammatori dipendenti dal contesto dello sviluppo. La disregolazione della segnalazione mediata dagli NLR è rilevante per gli studi sull’autoinfiammazione e sull’omeostasi immunitaria mucosale, offrendo un quadro per indagare come **Nlrp9a** influenzi i fenotipi infiammatori nei modelli murini.

NALP9A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nlrp9a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NALP9A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nlrp9a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nlrp9a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NALP9A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nlrp9a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NALP9A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NALP9A nelle cellule tumorali con espressione di Nlrp9a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.